科研样本，本就来之不易。

特别是由于电镜检测特殊的制片方法与观测方法，只有科学、标准的样本采集方法方可有效保证诊断的可靠性、权威性。

里来生物精心编辑电镜样本收集、保存运输方法，与您分享！

透射电镜

蛙肠绒毛透射电镜X肾脏基底膜透射电镜X

透射电镜在生物检测中的常规观察内容：

1.细胞样本观察常规细胞器（除中心粒）；

2.植物样本观察常规细胞器及结构；

3.动物组织观察常规细胞，细胞器。

透射电镜样本准备方法及要求

PS：以下所有样本尽量保持新鲜，固定液或悬浮液都不得冷冻结冰

1.动植物组织样本：

1、请尽快固定。动物组织最好在离体后1min内浸入3%戊二醛，开始固定。2、非灌注的组织，厚度不超过4mm，请用恰当方式（比如切宽薄片）体现位置和层次关系。3、有条件尽可能活体灌注固定，脑、神经、视网膜必须灌注固定，睾丸最好灌注固定，脑和方法见附件1。4、请用锋利的薄刀片切割组织，朝一个方向划，不要来回切割，不要挤压、拉扯，减少机械损伤。5、组织块大小：取米粒大小，或者黄豆大小，尽量薄，如下6、含有食物残渣、大量血液或其他黏附物的组织，请用生理盐水漂洗，再投入固定液。7、请保证固定液量充足。固定液和组织的体积比不小于20:1，密度较小的动植物组织样本，可加塞合适物品（纱布），使固定液和组织充分接触。8、运输条件：4℃的固定液中浸泡，放入盛有冰袋的泡沫盒运输至实验室，注意严禁结冰（太靠近冰箱后壁或冰袋运输都可能使组织结冰）。

2．细胞样本：

1、尽量用60mm的皿培养细胞，用胰酶消化或者细胞刮的方式收集于离心管中，常规离心收集细胞（里来选择rpm*5min）弃去上清液。2、弃上清，用吸管沿管壁缓慢加入1:5（3%戊二醛:0.1mol/LPBS缓冲液）稀释的固定液，重悬细胞，4℃静置5min。3、将步骤2的细胞悬液转移至1.5mL尖底EP管中，高速离心（里来选择rpm*10min）轻轻弃去上清液，保留沉淀，高速离心离紧后的样品体积不小于半颗绿豆大小。4、用吸管沿管壁缓慢加入3%戊二醛固定液（不可吹散细胞），收集后不能及时送样，可保存在4℃环境中。5、运输条件：离心弃固定液后加新的电镜固定液，转移至4℃保存，放入盛有冰袋的泡沫盒运输至实验室（一定使用1.5mL尖底EP管送样）。

人源细胞透射电镜X鼠源细胞透射电镜X

3．细菌样本：

1、观察细菌内部结构：直接将固体培养基上可见菌落整体剜下，连同培养基放于固定液中，悬浮细菌等需要收集离心固定，处理步骤与细胞样本要求完全一致。2、观察表面（鞭毛、菌毛、形态）：参考负染样品处理方法。

4．负染样本要求：

提前与公司确定好时间，再准备样品，放入盛有冰袋的泡沫盒运输至实验室，及时开展实验。

透射电镜样本准备注意事项：

1.细胞（细菌）样本，必须用1.5mL左右尖底EP管，离心成团（小米粒大小），样本不散开。

2.取材不能过大，固定液不能过少。

3.固定液只能选择3%（2.5%）戊二醛。

因样本制备特殊性，以下样本请联系确认是否可进行透射电镜检测：

1.组织或者细胞观察慢病毒、细菌；

2.细胞观察自噬体、凋亡小体、纳米材料；

3.细菌样本观察壁、膜；

4.样本有特定要求的（横纵切、多包、多切、多拍照、需统计、需计算的）；

5.要求特定倍数的，过低倍的；

6.常见组织，但观察内容较陌生的。如：皮肤组织，观察紧密连接、桥粒等；肝、肺组织，观察某类指定细胞；

7.骨组织、金属材料等坚硬物品；

8.粉末材料及易挥发物质；

9.纳米材料等；

10.液体物质。

大鼠肾脏透射电镜X小鼠回肠透射电镜X

扫描电镜

应用：观察和分析样品的三维表面形态。

扫描电镜的成像来源与质量由哪些方面决定：

样本本身性质：表面凹凸不平、成分差别、电压差异、表面电荷分布；

信号本身性质：二次电子、背散射电子、吸收电子；

对信号的人工处理。

小鼠子宫扫描电镜X鸡肌肉扫描电镜X

哪些属于常规的扫描样本？

固体：

a能用镊子夹起，并能分清正反面的样本（不用知晓正反面的除外）；

b粉末：绝大多数；

c玻片：能确切分清观察面的样本；

d材料：能确切分清观察面的样本。

液体：

移液枪可吸取的，较均一液体。观察液体中微生物或颗粒物质。

扫描电镜样本准备方法及要求

PS：以下所有样本尽量保持新鲜，固定液或悬浮液都不得冷冻结冰

1.动植物组织样本

1、取材前需进行动物麻醉、放血，避免组织内部血液太多，固定不充分；

2、动物死亡或组织离体后需尽快（推荐1-3min内）固定；

3、取材需取同一脏器同一部位，后期实验结果才具有可比性；

4、取材时器械要锐利，避免出现挤压、刮抹而造成的组织变形、缺损；

5、组织浸入固定液前需进行生理盐水冲洗，避免组织固定不充分而影响组织基本形态；

6、组织取下后立即投入电镜固定液内，转移至4℃保存，4℃冰袋运输。

2、细胞样本

贴壁细胞

贴壁于盖玻片的细胞培养处理成后弃培养基，用PBS轻轻漂洗后，弃PBS加电镜固定液转移至4℃保存，4℃冰袋运输。

悬浮细胞

离心收集细胞要肉眼可见细胞沉淀芝麻至绿豆大小，弃培养基后用PBS轻轻漂洗后，弃PBS加电镜固定液并将细胞吹打开悬浮于固定液内，转移至4℃保存，4℃冰袋运输，在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

黄杆菌扫描电镜X兔PRF膜扫描电镜X

3.其他类型样本：

含水量极少的，常温放置不易受潮，能较长时间保存的，可以不固定：大豆淀粉、纳米材料、粉末状材料、滤纸、大豆粒、米粒、干燥的叶片等；含水量较少，不易腐烂的，放入电镜固定液4℃保存运输：新鲜的植物叶片、新摘的水稻粒、动物骨头、新鲜的农作物。

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